2014年06月28日，江南公交新辟335路，起讫站为三兴村陈店村。

2016年07月01日，南京公交集团结束对中北巴士的托管管理，江南公交第一巴士公司旗下线路1路、3路、8路、11路、25路、28路、32路、40路、42路、45路、63路、64路、65路、66路、67路、68路、69路、71路、72路、73路、74路、76路、77路、79路、114路、122路、125路、130路、140路、143路、145路、146路、159路、176路、178路、184路、194路、195路、196路、197路、198路、199路、200路、201路、203路、206路、207路、208路、303路、308路、311路、315路、318路、319路、327路、328路、331路、332路、333路、334路、335路、336路、玉葛线、D5路、Y1路、Y19路、Y23路、B1路接驳线全面以公交集团标准运营管理，继续沿用第一巴士公司名称。

2019年11月01日，南京公交集团第一客运公司106路、159路、178路、184路、191路、191路区间、197路、198路、199路、200路、327路、328路、335路、B4路、D5路划归第二客运公司运营管理。

2021年05月01日，南京公交集团第二客运公司106路、107路、159路、165路、178路、184路、191路、191路区间、197路、198路、199路、200路、321路、322路、326路、327路、328路、329路、335路、344路、B3路、B4路、D1路、D5路、Y34路划归第一客运公司运营管理。

2024年12月21日，为合理优化公交线网布局，填补道路空白，提高运行效率，方便市民出行，南京公交335路（三兴村陈店村）调整走向，起讫站调整为花园公交总站陈店村。